En el laboratorio de microbiología: coexistencia de métodos de diagnóstico convencionales e innovadores

En este video, el Dr. Paño, médico especialista en enfermedades infecciosas, presenta el caso de Bill al Dr. García, microbiólogo.

El Dr. Paño ha enviado dos muestras al laboratorio de microbiología: una muestra de orina y una de sangre en frascos para hemocultivo. Pretende que el Dr. García le explique cómo se trabaja con estas muestras en el laboratorio, y cuál es el tiempo necesario para obtener una identificación y un perfil de sensibilidad a partir de ambas muestras.

Dr. García (microbiólogo): Primero, la orina. La muestra se siembra en placas de agar. Generalmente, las placas se analizan 24 horas después. Si no se observa un crecimiento bacteriano o fúngico, se considera que la orina es estéril. Si hay un crecimiento significativo. En este punto, ya sea mediante el análisis directo o con ayuda de pruebas rápidas, podemos saber si es una bacteria Gram positiva, una enterobacteria, un bacilo Gram negativo no fermentador o un hongo.

A continuación, ponemos en marcha la identificación definitiva y el análisis fenotípico de la sensibilidad a antimicrobianos. Esto tarda al menos 12 horas, aunque dependiendo del horario laboral de cada laboratorio puede llevar hasta 72 horas (fiestas, fines de semana, etc.).

Dr. Paño (médico especialista en enfermedades infecciosas): Gracias, Julio. ¿Y qué me dices del hemocultivo?

Dr. García: Los frascos de hemocultivo se incuban. Una vez que la incubadora detecta signos indirectos de crecimiento bacteriano, se realiza una tinción de Gram para el frasco positivo, a la vez que se siembran varias placas de Petri. Esto tarda más de 12 horas, aunque, de nuevo, depende del horario laboral del laboratorio. Una vez tiene lugar un crecimiento en la placa de Petri, el proceso es el mismo que con el urocultivo. Como puedes ver, con el hemocultivo hay un paso adicional, que es el tiempo que tarda en ser positivo el frasco de hemocultivo, que puede ser desde horas hasta cinco días.

Dr. Paño: Hasta cuatro días para tener los resultados finales de la sensibilidad puede ser demasiado tiempo para Bill, teniendo en cuenta su estado actual. ¿Cómo podríamos mejorar este intervalo?

Dr. García: Estoy de acuerdo, José. Cuatro días es demasiado. En primer lugar, debo decir que no se trata de una tarea únicamente del laboratorio de microbiología: todos podemos contribuir a acelerar el diagnóstico microbiológico. Es fundamental obtener muestras clínicas de buena calidad, y hacer que lleguen al laboratorio en las mejores condiciones y tan pronto como sea posible. También es fundamental ponerse en contacto con el microbiólogo, especialmente cuando se atiende a pacientes en estado crítico o inmunodeprimidos, o cuando se sospecha una etiología específica no habitual.

Dr. Paño: Touché, Julio. Para acelerar el diagnóstico microbiológico debemos empezar fuera del laboratorio de microbiología, y nosotros, el personal médico, de enfermería y otros profesionales sanitarios somos elementos clave. Aunque, teniendo en cuenta que todo este proceso previo al laboratorio se haya optimizado, ¿qué más podemos hacer para mejorar el tiempo necesario para un diagnóstico microbiológico?

Dr. García: Sin duda, las nuevas tecnologías pueden ayudar, y más específicamente la forma en que se integran en el flujo de trabajo del laboratorio de microbiología. Por ejemplo, hemos integrado la tecnología MALDI-TOF MS en nuestro proceso para la identificación, lo que ha supuesto una disminución de 12-48 horas en la identificación de las muestras aisladas bacterianas y fúngicas. MALDI- TOF MS significa espectrometría de masas con desorción/ionización láser asistida por matriz con detección de iones de tipo TOF (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry). La técnica MALDI-TOF MS permite identificar bacterias y hongos en un plazo de minutos, directamente a partir de colonias incubadas en placas de cultivo e incluso de los frascos de hemocultivo positivos. La aplicación del MALDI-TOF a los frascos de hemocultivo positivos permite una identificación precisa en unos 30-60 minutos desde que se detecta la positividad, en lugar de las 12-36 horas necesarias mediante las estrategias convencionales. ¿Te gusta?

Dr. Paño: Sí, me gusta, Julio. Aunque esta tecnología parece cara.

Dr. García: Sin duda, la tecnología MALDI-TOF MS tiene un costo de adquisición importante. Hay varias empresas que trabajan con esta tecnología, y ofrecen distintas opciones comerciales para que los laboratorios de microbiología la adopten (compra, alquiler, etc.). Desde mi punto de vista, los beneficios de integrar el MALDI-TOF en el proceso de identificación en el laboratorio de microbiología superan con creces los costos. No obstante, entiendo que hay una gran diversidad de centros asistenciales y que las decisiones deben ser individualizadas.

Dr. Paño: Todavía no has hablado de la PCR (reacción en cadena de la polimerasa). ¿Qué opinas de ella?

Dr. García: La PCR, y más específicamente la PCR múltiple, puede acelerar de forma significativa la identificación microbiológica. En un par de horas podemos identificar los microorganismos, e incluso algunos mecanismos de resistencia, en muestras directas, incluso antes de que se observe crecimiento alguno. Las claves para una implementación satisfactoria de los análisis basados en la PCR son la disponibilidad de kits fáciles de usar, a tiempo real y con un costo asumible por cada prueba, para asegurar una disponibilidad a cualquier hora y todos los días del año, así como la integración con los programas de optimización del uso de antimicrobianos. Hay otras estrategias genéticas además de la PCR; por ejemplo, la hibridación in situ fluorescente (FISH) con sondas de ácido peptidonucleico.

Dr. Paño: En resumen, Julio. ¿Cuándo esperamos tener los resultados definitivos de la identificación y la sensibilidad a antimicrobianos para determinar el tratamiento antibiótico de Bill?

Dr. García: En cuanto a la orina, en 12 horas sabremos si hay un crecimiento significativo y, en ese caso, identificaremos los microorganismos mediante MALDI-TOF en aproximadamente 30 minutos más. Si todo sale bien, necesitaremos entre 12 y 24 horas para obtener los resultados finales de la sensibilidad a antimicrobianos. En lo que respecta al hemocultivo, aplicaremos el MALDI-TOF al frasco de hemocultivo positivo, por lo que deberíamos tener una identificación en unos 30-60 minutos tras la positividad del frasco; realizaremos un análisis directo de la sensibilidad en una alícuota estandarizada del frasco positivo, y esperamos tener los resultados finales 12 horas después.

Dr. Paño: Muchas gracias, Julio. Volveré a menudo al laboratorio de microbiología.

Dr. García: De nada.

En la sección «ver también» de la parte inferior de la página encontrarás varios vídeos que explican las pruebas que han comentado el Dr. Paño y el Dr. García. Puede que quieras verlos para ampliar tus conocimientos sobre lo que pueden ofrecer estas pruebas diagnósticas.