Dentro do laboratório de microbiologia: coexistência de diagnósticos convencionais e novas alternativas

Neste vídeo, Dr. Paño, médico especialista em doenças infecciosas apresenta o caso de Bill a Dr. García, microbiologista.

O Dr. Paño forneceu ao laboratório de microbiologia duas espécimes: uma amostra de urina e uma amostra de sangue inoculada em frascos de hemocultura. Ele está interessado em compreender com o Dr. García como essas amostras são processadas no laboratório e qual é o tempo de resposta para a identificação e suscetibilidade de ambas as amostras:

Dr. García (Microbiologista): Primeiro Urina. A amostra é semeada em placas de ágar. As placas são lidas geralmente 24 horas depois. Se nenhum crescimento bacteriano ou fúngico for observado, a urina será estéril. Se crescimento significativo. É um bacilo Gram-positivo, Enterobacteriaceae, Gram-negativo não fermentado ou uma levedura. Neste ponto, com qualquer teste direto ou com a ajuda de alguns testes rápidos, podemos saber se é um Gram-positivo, Enterobacteriaceae, bacilos Gram-negativos não fermentados ou uma levedura.

Em seguida, realizamos a identificação definitiva e o teste de susceptibilidade antimicrobiana fenotípica. Estes testes não levam menos de 12 horas, mas depende do horário de trabalho de cada laboratório, podendo levar até 72 horas (feriados, fins de semana…).

Dr. Paño (Médico de Doenças Infecciosas) Obrigado, Julio. E quanto às culturas de sangue?

Dr García: As garrafas de cultura de sangue são incubadas. Uma vez que a incubadora detecta sinais indiretos de crescimento microbiano, uma mancha (um ponto) de gram da garrafa positiva é identificada e, ao mesmo tempo, é transferido para diversos discos de Petri.

Isso leva mais de 12 horas, mas novamente vai depender do horário de trabalho do laboratório. Uma vez que houve o crescimento na placa de Petri, o processo é o mesmo que com a cultura de urina. Como você pode ver, com hemoculturas há um passo adicional, que é até que a hemocultura se torne positiva, o que pode levar de horas a cinco dias.

Dr. Pano: Até quatro dias dos resultados finais de suscetibilidade pode ser tempo demais para Bill, considerando sua condição atual. Como esse intervalo poderia ser melhorado?

Dr. García: Eu concordo, José. Quatro dias é demais. Em primeiro lugar, devo dizer que esta não é uma missão apenas de laboratório de microbiologia: todos nós podemos contribuir para acelerar o diagnóstico microbiológico. É essencial obter amostras clínicas de boa qualidade e fazê-las chegar ao laboratório nas melhores condições o quanto antes. É preciso se comunicar com o microbiologista, especialmente quando se trata de pacientes gravemente enfermos, pessoas imunossuprimidas ou sempre que houver suspeita etiológica específica, não usual.

Dr. Paño: Touché, Julio. Acelerar o diagnóstico microbiológico começa fora do laboratório de Microbiologia, e nós, clínicos, enfermeiros e outros profissionais de saúde somos fundamentais. Mas, supondo que todo esse processo pré-laboratorial tenha sido otimizado, o que mais pode ser feito para melhorar o tempo do diagnóstico microbiológico?

Dr. García: Uma nova tecnologia e, mais especificamente, no campo de trabalho do laboratório de microbiologia, sem dúvida, pode ajudar. Por exemplo, integramos MALDI-TOF MS em nosso fluxo de trabalho de identificação, levando a um decréscimo de 12-48 horas na identificação de isolados bacterianos e fúngicos. MALDI-TOF MS significa Espectrometria de Massa de Tempo de Voo de Dessorção / Ionização por Laser Assistida por Matriz. MALDI-TOF MS pode identificar bactérias e leveduras em poucos minutos de colônias cultivadas em cultura e de frascos positivos de hemocultura. A aplicação de MALDI-TOF a hemocultura positiva fornece uma identificação precisa dentro de 30 a 60 minutos da positividade detectada, em vez de 12 a 36 horas da abordagem convencional. Você gosta disso?

Dr. Paño: Sim, eu gosto, Julio. Mas essa tecnologia parece ser cara.

Dr. García: Inquestionavelmente MALDI-TOF MS tem custos de aquisição significativos. Existem várias empresas trabalhando nessa tecnologia oferecendo diferentes abordagens de marketing para laboratórios de Microbiologia adotarem MALDI-TOF MS (compra, arrendamento…). Do meu ponto de vista, os benefícios da integração do MALDI-TOF para identificar o fluxo de trabalho no Laboratório de Microbiologia claramente superam seus custos. No entanto, entendo que existe uma enorme diversidade de cuidados de saúde e decisões individualizadas.

Dr. Paño: Você ainda não falou sobre PCR (reação em cadeia da polimerase). O que você acha disso?

Dr. García: PCR, e mais especificamente Multiplex-PCR pode acelerar significativamente a identificação microbiológica. Em poucas horas, podemos identificar microorganismos e até mesmo alguns mecanismos de resistência em amostras diretas, mesmo antes de qualquer crescimento ter sido observado. Chaves para uma implementação bem sucedida de testes baseados na disponibilidade PCR 24/7, bem como a integração com programas de gestão antimicrobiana. Existem outras abordagens baseadas na genética à parte da PCR (i.e. Hibridação In Situ Fluorescente Fluida de Péptido Nucleico).

Dr. Paño: Para resumir, Julio. Quando devemos ter uma identificação definitiva e resultados de susceptibilidade antimicrobiana para atingir a terapia antimicrobiana de Bill?

Dr. García: Com relação à urina, em 12 horas saberíamos se há um crescimento significativo e, nesse caso, identificaríamos os microrganismos com MALDI-TOF em 30 minutos adicionais, aproximadamente. Se tudo funcionar bem, precisaríamos de 12 a 24 horas para obter os resultados finais de susceptibilidade antimicrobiana. Para a hemocultura, uma hemocultura positiva, podemos ter de 30 a 60 minutos de positividade para a garrafa e estabelecer um teste de suscetibilidade direta na alíquota não padronizada da garrafa positiva. Espera-se que haja resultados finais de suscetibilidade 12 horas.

Dr. Paño: Muito obrigado, Julio. Voltarei muitas vezes ao Laboratório de Microbiologia.

Dr. García: Você é bem-vindo.

Na seção “veja também” abaixo existem vários vídeos o explicando os testes que Dr. Paño e Dr. García vêm discutindo.  Você pode vê-los para aumentar a sua compreensão sobre o que estes testes de diagnóstico podem oferecer.

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This video is from the free online course:

Stewardship de Antimicrobianos: Gerenciamento da Resistência Antimicrobiana

University of Dundee