微生物实验室内部：传统和新颖诊断方法共存

在本视频中，感 染病医生 Paño 博士 向微生物学家 García 博士介绍了 Bill 的病例。

Paño 博士已向微生物实验室提供了两份样本：在血液培养瓶中接种的尿样和血样。他很想向 García 博士了解在实验室中如何处理这些样本以及两份样本的鉴定和敏感性试验的耗时:

García 博士（微生物学家）：首先介绍尿样。将样本接种在琼脂平板上。通常在 24 小时后读板。如果未观察到细菌或真菌生长，则将尿样报告为无菌。如果明显生长。此时，通过直接测试或借助一些快速测试，我们可以了解它是革兰阳性菌、肠杆菌科、非发酵革兰氏阴性菌还是酵母菌。

然后，我们进行鉴定和表型抗菌药物敏感性测试。这些测试所需的时间不超过 12 小时，但根据每个实验室的工作时间，可能需要长达 72 小时（储库假日、周末…）

Paño 博士（感染病医生） 谢谢，Julio。那么血液培养呢？

García 博士：首先孵育血培养瓶。一旦孵育器检测到间接的微生物生长迹象，立即对阳性瓶进行革兰染色，同时我们在多个皮氏培养皿中加样。这需要 12 小时以上，但是仍然取决于实验室工作时间。当皮氏培养皿中出现生长时，流程与尿样培养相同。您可以看到，血培养中还有一个步骤，在此步骤中血液培养瓶变成阳性，它可能需要几小时到五天。

Paño 博士：鉴于 Bill 当前的病情，长达四天才能得到最终敏感性结果可能会太迟。如何才能缩短此间隔时间？

García 博士：我同意，José。四天时间太长了。首先，我必须指出这不只是微生物实验室部门的使命：我们所有人都能为加快微生物学诊断速度做出贡献。获得优质的临床样本并尽快将它们以最佳状况送达实验室是基本要求。基本要求还包括与微生物学家交流，尤其是治疗危重患者、宿主处于免疫抑制状况或怀疑存在异常的特定病因时。

Paño 博士：您说的对，Julio。加快微生物学诊断速度的努力已经不仅限于微生物实验室，我们临床医生、护士和其他专业医护人员都很关键。但是，假定所有这些实验室前流程都已经过优化，还可采取哪些措施改进微生物学诊断的时间？

García 博士：毫无疑问，新技术以及更有针对性地将其整合到微生物实验室工作流程中会有帮助。例如，我们已将 MALDI-TOF MS 融合到鉴定工作流程，因此将细菌和真菌分离菌的鉴定时间缩短了 12-48 小时。MALDI-TOF MS 代表基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法。MALDI-TOF MS 可在几分钟内从培养板 上生长的菌落甚至从阳性血液培养瓶直接鉴定细菌和酵母菌。对阳性血液培养瓶应用 MALDI-TOF，可在检测到阳性结果后 30-60 分钟内完成准确的鉴定，而传统方法需要 12-36 小时。您有兴趣吗？

Paño 博士：是的，我有兴趣，Julio。但是，这种技术看上去很贵。

García 博士：确实，MALDI-TOF MS 的购置成本很高。有一些公司致力于这种技术，他们提供了不同的营销途径以供微生物实验室采用 MALDI-TOF MS（购买、租借…）。我认为，将 MALDI-TOF 融合到微生物实验室的鉴定工作流程的价值远胜过它的成本。但是，我也知道，各种医疗环境存在巨大差异，必须根据自身的情况单独做出决定。

Paño 博士：您尚未谈到 PCR（聚合酶链反应）。您对它有什么看法？

García 博士：PCR，特别是多重 PCR，可显著地加快微生物学鉴定速度。在几个小时内，即使未观察到生长，我们仍可直接从样本识别出微生物，甚至还包括一些耐药性机制。成功部署基于 PCR 的测试的关键是可实时获得易于操作的试剂盒，且每次测试的成本不会太高以保证 24/7 全天候可用性，以及与抗菌药物管理计划的整合。除了 PCR，还有其他基于遗传的方法（例如，肽核酸荧光原位杂交）。

Paño 博士：Julio，总的来说，我们什么时候有望获得明确鉴定和抗菌药物敏感性结果以确定 Bill 的抗菌疗法？

García 博士：对于尿样，在 12 个小时内我们将可知道是否有显著生长，在这种情况下我们再需要大约 30 分钟即可利用 MALDI-TOF 识别微生物。如果一切顺利，我们需要 12-24 小时即可获得最终抗菌药物敏感性结果。对于血液培养，通过对阳性血液培养瓶应用 MALDI-TOF，我们在得出阳性瓶结果后 30-60 分钟内即可得出鉴定结果；对阳性瓶的标准化等分试样进行直接敏感性测试，预计 12 小时后我们即可获得最终敏感性结果。

Paño 博士：非常感谢，Julio。我以后会经常到微生物实验室来。

García 博士：欢迎您来。

在下面的“另请参阅”部分，提供了一些视频，解释 Paño 博士和 García 博士讨论的测试。您可能希望观看这些视频，深入了解这些诊断测试的效益。